负峰/倒峰的可能原因,通常与色谱柱、样品、流动相、检测器有关:
(1)色谱柱污染、损坏或种类选择不合理
(2)样品配制问题
(3)残留或记忆峰,一般是由阀、检测器的流动池死角、手动进样时进样针头沾污引起
如果进样时注射器内有上一个样品的残留组分,就会干扰下一个样品的分析,带来误差
(4)流动相不够纯净,在设定波长下有较大背景
(5)流通池有气泡产生,可能是流动相带入的气泡,或手动进样载入的气泡
(6)用紫外检测器时,溶解样品所用的溶剂与流动相溶剂不能互溶或两溶剂PH值不同或洗脱能力相差过大。
当溶剂流过检测池时,光在两种互不溶溶的界面上产生折射,从而使光电池接受到不同强度的光,光强度减弱,低于参比
(7)用紫外检测器时的溶剂峰,样品的溶剂的紫外吸收小于流动相的紫外吸收
(8)用紫外检测器时的杂质,杂质没有紫处吸收或吸收很小,而流动相紫外吸收大,如用甲醇时波长设定在220nm以下
(9)用荧光检测器时,由于检测器灵敏度高,样品过载(浓度过高或进样量过大)使得峰前沿凸起
(10)用示差检测器检测时,样品的折光率小于流动相溶剂的折光指数,或者极性接反了,表现为全部是倒峰
对应的解决方法:
(1)冲洗、再生或更换色谱柱,看是否仍然出现倒峰,来确定是柱子还是检测器的问题
(2)换一个样品或走一针空白,来判断是否是该样品的问题
(3)进样时,在样品间插入洗针;关闭仪器维护时,清洗阀、流通池、进样针等
(4)检查溶剂等级;使用前抽滤流动相
(5)超声去除流动相中的气泡;检查在线脱气机;手动进样前排出气泡
(6)采用能与流动相溶剂互溶的溶剂来溶解样品;调节盐浓度使得样品和流动相pH一致;调整洗脱梯度
(7)溶剂峰有时候并不影响积分,要去除的话溶剂改用流动相
(8)优化色谱条件和分析方法
(9)稀释样品,或减少进样量
(10)想要样品表现为正峰,改变检测器或记录仪的极性
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